La Albúmina de Suero Bovino (ASB) es universal en el laboratorio, ya que tiene usos en la técnica de Western blot, en cultivos celulares, en PCR y más, pero la versatilidad de la ASB ha permitido a los investigadores hacerse muchas preguntas comunes. En vez de capturar las preguntas a través de Internet, nosotros identificamos 6 preguntas muy comunes en relación a la ASB y proveemos algunas respuestas muy detalladas que pueden servir como guía útil en el uso de ASB.
1. ¿Qué Tipo De ASB Debería Usar Para Mi Experimento?
En nuestro previo artículo de este tópico, en efecto, guiamos la pregunta de lo que es la ASB en mayor detalle. Esta pregunta se debe a que hay muchos tipos de ASB disponibles, los cuales se dirigen a un amplio rango de aplicaciones, cada una con características que ayudan a optimizar una técnica de laboratorio. Por ejemplo, tú podrías usar una ASB libre de IgG (inmunoglobulinas) si requieres bloquear un agente.
Para decidir cual ASB usar se debe basar en el tipo de experimento que vas a realizar y las necesidades específicas que tengas. Después de dar una mirara al artículo antes mencionado y su tabla de guía de selección, es bueno incluso referirse a otros recursos tales como ResearchGate para obtener más información y una respuesta más personalizada.
2. ¿Cómo Actúa La ASB Como Un Agente De Bloqueo?
Los agentes de bloqueo están destinados a prevenir la unión inespecífica de anticuerpos. En general, siempre que una proteína no tenga afinidad por su sonda, teóricamente puede usarse como un agente bloqueante. Pero si escoges algo aleatorio, tu experimento probablemente será ineficiente. Además, hay ciertas proteínas que son direccionadas a este tipo de trabajo. Este tipo de proteínas se unen más consistentemente a la membrana, mejorando la sensibilidad del experimento y reduciendo la interferencia del fondo.
Entonces, por qué usar ASB? Primero que todo, tú no sólo deseas cualquier ASB. Muchos tipos de ASB contienen IgGs (lo que está bien para otras aplicaciones), lo cual puede dar lugar a uniones inespecíficas. El objetivo es trabajar con una proteína que conservará tu experimento en óptimas condiciones, así, en el caso del agente de bloqueo, particularmente ASB, debes considerar tipos que sean libres de inmunoglobulinas.
3. ¿Debería Usar ASB o Leche Para Mi Experimento De Western Blot?
Los dos agentes de bloqueo más frecuentemente usados en los laboratorios son la leche no grasa y la ASB. También hay pros y contras para cada uno. La leche es usalmente más asequible y fácil de prepar a partir de polvo comparado a la ASB; sin embargo, la leche no es buena para usar en sistemas avidina-biotina debido a que la leche contiene biotina y la leche no debería ser usada con proteínas fosforiladas.
Típicamente cuando se trabaja con proteínas fosforiladas, la ASB tiende a trabajar mejor como agente de bloqueo. Esto debido a que la leche tiene una gran variedad de proteínas, una de las cuales es la caseína fosfoproteína, la cual da pie a un fondo mayor. De seguro con todos los consejos, hay casos especiales. La mejor regla del dedo cuando se trabaja con proteínas fosforiladas es empezar con ASB y luego optimizar desde allí.
4. ¿Por Qué La Estimación De La Concentración De Proteína Usualmente Requiere ASB?
Con el fin de estimar la concentración de proteína de una muestra desconocida, necesitarás compararla a una muestra de referencia que se asemeje a tu muestra. No obstante, esto no siempre es fácil encontrarlo, así que la ASB juega el rol de referencia. Hay unos pocos factores que hacen que la ASB sea una referencia apropiada a usar como por ejemplo: es abundante, es muy asequible, es muy estable y no tendrá un alto impacto en las reacciones bioquímicas.
5. ¿Es La Albúmina De Suero Bovino (ASB) Y El Suero Bovino Fetal (SBF) La Misma Cosa?
No, no son lo mismo. El Suero Bovino Fetal es comúnmente usado como un suplemento de suero para cultivos celulares eucarióticos. El beneficio del SBF para el cultivo celular es su bajo nivel de anticuerpos y altos niveles de factores de crecimiento. La Albúmina de Suero Bovino (ASB) es usada en una variedad de aplicaciones de laboratorios incluyendo su función como estándar de concentración de proteína, su función como nutriente celular y su habilidad para estabilizar enzimas durante la digestión por restricción. La conclusión importante aquí es que, si bien a menudo ambos aparecen en las búsquedas de Google cuando sólo se busca uno u otro, y suenan muy similares, en efecto son diferentes.
6. ¿Por Qué Es Importante Que La ASB Sea Manufacturada En Los Estados Unidos?
La importancia de adquirir tu ASB sea desde Estados Unidos o de Australia se debe a la preocupación por la encefalitis espongiforme bovina infectada por priones (en inglés Bovine Spongiform Encephalitis o BSE). No ha habido un brote en los Estados Unidos, lo que hace que estos productos sean más confiables. GoldBio particularmente enfatiza que su ASB se hace en los Estados Unidos en un ambiente cerrado con animales inspeccionados por la USDA, y es certificado por ser un producto libre de BSE/TSE.
Escrito por: Katherine Martin
Traducido por: Adriana Gallego
