Al buscar células competentes para su investigación, es posible que encuentre algunos nombres desconocidos de cepas bacterianas, terminología y características. Para ayudarlo a elegir células competentes, este artículo le brinda información sobre algunas consideraciones, comparaciones y cepas.


¿Cómo elegir las células competentes adecuadas para mi experimento?

1.Método de Transformación

Una consideración importante antes de elegir celdas competentes es si planea realizar una transformación por choque térmico o una electroporación.

Puedes obtener una mayor eficiencia de transformación realizando electroporación que con la transformación por choque térmico. Pero debes eliminar las sales (como por ejemplo el cloruro de calcio) de sus células competentes para evitar un arco eléctrico. Por lo tanto, para la electroporación, utilice únicamente celdas electrocompetentes fabricadas con métodos sin sal.

La electroporación también requiere un electroporador. Si tu laboratorio no está equipado con un electroporador, elija celdas químicamente competentes para la transformación por choque térmico.


2.Eficiencia de Transformación

La eficiencia de transformación de las células competentes indica que las células contienen el ADN clonado después de la transformación. Cuanto mayor sea el número, más eficientes serán las células competentes. Por lo tanto, este número es un factor importante para obtener los clones deseados.

Generalmente, las células competentes con eficiencias de transformación adecuadas (106- 108 cfu/µg) son ideales para clonar y subclonar muchos plásmidos de tamaño regular (<10 kb).

La eficiencia de tus células competentes es más importante cuando se realiza un experimento desafiante, como la clonación de plásmidos grandes. Cuando se utilizan células competentes menos eficientes, se pueden obtener menos clones positivos o, lo que es peor, ninguno. Por lo tanto, si has encontrado que tus ligaciones son increíblemente difíciles, prueba con Las células competentes GoldBio con una eficiencia de transformación ultra alta (>1010 cfu/µg), por ejemplo DH10B-Pro™.


3. Genotipo de Células

Comprender el genotipo y las propiedades de las células te ayudan a lograr los resultados de forma anticipada después de la transformación.

Por ejemplo, algunas cepas bacterianas tienen una deleción parcial del gen lacZ en la región alfa, representada como lacZΔM15. Las cepas con este genotipo le permiten realizar un escaneo de cepas azules y blancas después de la transformación y seleccionar así células transformadas.

Para obtener más información sobre los diferentes genotipos de Escherichia coli, te invitamos a leer este artículo de GoldBio:


Guía a la Nomenclatura de Marcadores Genéticos y Genotipo de Guía a la Nomenclatura de Marcadores Genéticos y Genotipo de E. coli

4. Aplicaciones posteriores

Antes de seleccionar células competentes, debe considerar los resultados esperados de la transformación. Para la expresión de proteínas, necesitará una cepa de células competentes diferente a la que usaría para la clonación regular.

A lo largo del resto de este artículo, analizaremos diferentes aplicaciones posteriores y qué tipos de células competentes son las más apropiadas para esos métodos.

Cuales celulas competentes deberia usar?


¿Qué Células Competentes Debería Usar para Clonación y Subclonación?

Para la clonación y subclonación, elige células competentes con una eficiencia de transformación ultra alta, como las de GoldBio DH5-alfa (células electrocompetentes o células químicamente competentes) o DH10B ™ alfa (células electrocompetentes o células químicamente competentes).

Transformacion bacteriana

El DH5-alfa tiene la mutación recA1, preferible para mantener la estabilidad del ADN clonado. Además, tiene la mutación endA para prevenir la escisión y degradación del ADN, lo que da como resultado una gran cantidad y calidad de ADN. Esta cepa es eficaz para clonar ADN no metilado a partir de PCR o ADNc.

DH10B™ tiene mutaciones recA1 y endA1, lo que da como resultado ADN de alta calidad. También porta mutaciones para mcrA, mcrBC, y mrr. McrA, McrBC y Mrr son enzimas codificadas por mcrA, mcrBC, y mrr. Estas enzimas forman parte de sistemas de modificación-restricción en los que se produce la digestión del ADN metilado. Por lo tanto, la cepa con estas mutaciones genéticas permite la clonación de ADN metilado, particularmente para clonar ADN genómico eucariota.


¿Cuáles son las Células Competentes Adecuadas a Usar en Transformación de Plásmidos Grandes?

Las células competentes DH10B-Pro™ de GoldBio son adecuadas para la transformación de plásmidos grandes, que van desde ≥10 kb hasta 350 kb. Al igual que DH10B ™, DH10B-Pro ™ también se puede utilizar para el protocolo de escaneo azul-blanco y es compatible con la clonación de ADN metilado. Además, esta cepa puede producir un gran número de células transformadas para una clonación más difícil.


¿Cuáles son las Células Competentes a Usar en la Construcción de una Librería de ADNc y Genómico?

Si planea crear bibliotecas genómicas y de ADNc, considere las células electrocompetentes o células químicamente competentes DH10B ™ o las células electrocompetentes DH10B-Pro™ de E. coli. Ambas cepas tienen eficiencias de transformación ultra altas y permiten la clonación de ADN metilado.

Otra opción es utilizar células competentes de otra bacteria, por ejemplo, Lactococcus lactis. Tanto MG1363 como IL1403 también pueden usarse para la construcción de bibliotecas genómicas y de ADNc.



construccion de una libreria de ADN genomico


¿Cuáles Células Competentes Escoger en Expresión de Proteínas?

Para la expresión de proteínas recombinantes, puedes utilizar BL21 (células químicamente competentes) o BL21 (DE3) (células químicamente competentes y células electrocompetentes). BL21 y BL21 (DE3) pertenecen a la cepa B, deficiente en proteasas Lon y OmpT, por lo que reducen la degradación y promueven la estabilidad de sus proteínas sintetizadas. La adición de IPTG al medio de crecimiento induce la producción de proteínas para ambas cepas.

Para comprender cómo IPTG induce la síntesis de proteínas, te invitamos a leer nuestro artículo de GoldBio:

Una Inmersión Profunda en la Inducción con IPTG

La cepa BL21 es apropiada para la transformación y expresión rutinaria de proteínas a partir de un vector sin promotor T7. El promotor T7 es una secuencia de ADN, reconocida por la ARN polimerasa T7.

BL21 (DE3) lleva el fago DE3 que codifica la ARN polimerasa de T7. Esta cepa es adecuada para la expresión de proteínas con el promotor T7. También se puede seleccionar esta cepa para su uso con otros promotores reconocidos por la polimerasa de ARN T7 de E. coli, por ejemplo: promotor lac, tac, trc, ParaBAD, PrhaBAD y T5.


Produccion de proteinas


¿ Qué Célula Competente es Buena para Visualización de Fagos?

Para el escaneo de la biblioteca de fagos, elija Visualización de Fato TG1. La visualización de Fago TG1, una cepa supresora ámbar (supE), suprime la mutación ámbar sin sentido (mutación que inserta codones de parada UAG que conducen a proteínas truncadas). Por lo tanto, esta cepa apoya el crecimiento del fago y permite la incorporación de un codón de parada ámbar entre la proteína mostrada y la proteína de la cubierta del fago. Esta cepa es muy eficaz para la presentación de fagos.

Construccion de una libreria de visualizacion de fago

¿Qué Células Competentes Usar en Transformación Vegetal?

Para la transformación de plantas, seleccione Agrobacterium AGL-1 o GV3101. Ambas cepas tienen un fondo cromosómico C58 con resistencia a la rifampicina para la selección.

El Agrobacterium AGL1 transporta el plásmido inductor de tumores hipervirulento y debilitado pTiBo542, lo que permite una transformación óptima del ADN. La cepa AGL1 tiene una mutación en su gen recA, lo que respalda la estabilidad del ADN clonado. Esta cepa también tiene un marcador de resistencia a la carbenicilina para su selección.

El Agrobacterium GV3101 porta el plásmido Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) con resistencia a la gentamicina.

Puedes elegir GV3101 para la transformación de plantas de Arabidopsis thaliana, maíz y otras monocotiledóneas. De lo contrario, use AGL1 para la transformación de plantas de varias dicotiledóneas, incluidas A. thaliana, tabaco, papa y soja.

Transformacion vegetal

Para ayudarle a decidir, a continuación encontrará una guía para comparar las células competentes de GoldBio:

https://www.goldbio.com/documents/4076/GoldBio%20Competent%20Cells%20Characteristic%20and%20Applications%20Guide.pdf


Productos Relacionados

Encuentra más detalles sobre las células competentes GoldBio a continuación:

Células E.coli Químicamente Competentes DH5-alpha (Catálogo No. CC-101)

Células E.coli Electrocompetentes DH5-alpha (Catálogo No. CC-203)

Células E.coli Químicamente Competentes DH10B (Catálogo No. CC-100)

Células E.coli Electrocompetentes DH10B (Catálogo No. CC-200)

Células E.coli Electrocompetentes DH10B-Pro™ (Catálogo No. CC-201)

Células E.coli Químicamente Competentes BL21 (Catálogo No. CC-102)

Células E.coli Químicamente Competentes BL21 (DE3) (Catálogo No. CC. 103)

Células E.coli Electrocompetentes BL21 (DE3) (Catálogo No. CC-204)

Células E.coli Químicamente Competentes DL39 (DE3) (Catálogo No. CC-104)



Referencias

Carmen, S., & Jermutus, L. (2002). Concepts in antibody phage display. Briefings in Functional Genomics & Proteomics, 1(2), 189–203. https://doi.org/10.1093/bfgp/1.2.189.

Koncz, C., & Schell, J. (1986). The promoter of TL-DNA gene 5 controls the tissue-specific expression of chimaeric genes carried by a novel type of Agrobacterium binary vector. Molecular and General Genetics MGG, 204(3), 383–396. https://doi.org/10.1007/bf00331014.

Lazo, G. R., Stein, P. A., & Ludwig, R. A. (1991). A DNA Transformation–Competent Arabidopsis Genomic Library in Agrobacterium. Bio/Technology, 9(10), 963–967.

Wu, C.-H., Liu, I.-J., Lu, R.-M., & Wu, H.-C. (2016). Advancement and applications of peptide phage display technology in biomedical science. Journal of Biomedical Science, 23(1).



Escrito por: Tyasing Kroemer, Ph.D.

Traducido por: Adriana Gallego, Ph.D